當歸揮發油對大鼠十二指腸慢波肌電活動的作用討論論文
當歸揮發油為常用中藥當歸的主要有效組分之一。研究表明，當歸揮發油含有藁本內酯、正丁烯基苯酞內酯等多種成分。近年來本課題組研究表明，當歸揮發油對機體平滑肌具有廣泛的藥理活性，且認為當歸揮發油可能在防治胃腸道平滑肌動力紊亂性疾病方面具有重要的應用價值。本研究采用生物信號采集分析系統，觀察當歸揮發油對大鼠十二指腸肌電活動的影響，從電生理角度分析當歸揮發油對腸平滑肌作用的特點和規律，為進一步開發當歸的藥用價值提供實驗依據。
1 材料和方法
1. 1 試驗藥物當歸揮發油，岷縣康達藥業開發有限責任公司提供( 取生當歸飲片1kg，置于5L 超臨界萃取設備進行CO2超臨界流體萃取，萃取壓力為25MPa，萃取溫度為40℃，萃取時間為6 小時、CO2流量為2L/kg·h，當歸萃取液過濾，濾液靜置，取油層，得8. 2g 揮發油，當歸揮發油含量為0. 82g /100g 藥材，所得當歸揮發油經GC-MS 分析，藁本內酯含量為81. 4%。) ，實驗時用0. 1%泊洛沙姆-127 配制0. 4%、0. 2%、0. 1% 的當歸揮發油乳狀液。鹽酸多巴胺注射液( 江蘇亞邦強生藥業有限公司，批號130316) ; 多潘立酮片( 西安楊森制藥有限公司，批號130410523) ; 甲硫酸新斯的明注射液( 浙江仙琚制藥股份有限公司，批號120301) ; 硫酸阿托品注射液( 天津金耀氨基酸有限公司，批號1207071) ，鹽酸維拉帕米( 上海信誼藥廠有限公司，批號120601) ; 氯化鋇( 天津市光復科技發展有限公司，XK 13-201-00520) 。
1. 2 動物Wistar 大鼠，雌雄兼用，體質量180 ～ 220g，SPF 級，由甘肅中醫學院實驗動物中心提供，合格證編號: SCXK( 甘)2011-0001，SPF 級飼料( 由北京科奧協力飼料有限公司供給) 喂養，自由飲水，適應性飼養3 天后進行實驗。
1. 3 試劑泊洛沙姆( 上海源葉生物科技有限公司，批號2014 /12) 。
1. 4 儀器BL-420F 生物機能實驗系統，成都泰盟科技有限公司; 動物恒溫手術臺ST-1 型。
1. 5 方法取大鼠，禁食不禁水18 h， 10% 水合氯醛( 0. 33ml /100g) 腹腔注射麻醉，仰位固定，腹部備皮，常規消毒，劍突下正中做3 ～ 5cm 切口，暴露胃及小腸。自幽門向下將針狀電極從十二指腸( 幽門下2 cm 處) 垂直縱行肌刺入漿膜下2mm 肌層固定( 電極直徑0. 3 mm，電極間距離約0. 3cm) ，參考電極夾于皮下，電極輸入端與BL-420F 生物機能實驗系統相連接。設置參數即可進行信號的采集，記錄過程中在腸管上方覆蓋溫生理鹽水紗布，同時控制室溫在25℃。根據預實驗，BL-420F 生物機能實驗系統的采集參數設置為: 增益500μV，時間常數0. 3s，濾波50Hz，掃描速度500ms /div，50Hz 限波開啟，以SWMF 和SWMA 作為主要統計指標，以5min 為時間段，記錄慢波肌電圖，計算平均SWMF 和SWMA。
2 結果
2. 1 當歸揮發油對正常大鼠十二指腸慢波肌電的影響取大鼠24 只，隨機分為4 組，設正常對照組和當歸揮發油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 劑量組，每組6 只，按上述方法建立測試系統，觀察記錄各組大鼠十二指腸慢波肌電波形，待穩定后，記錄給藥前5min 內慢波肌電圖; 當歸揮發油三種劑量組大鼠分別尾靜脈注射0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 的當歸揮發油乳濁液10ml /kg，正常對照組給予0. 1%泊洛沙姆生理鹽水溶液10ml /kg。分別記錄給藥后第10、20、40、60min 起始5min 內慢波肌電圖，計算平均SWMF 和SWMA。結果顯示，不同劑量的.當歸揮發油對正常大鼠十二指腸SWMF 和SWMA 的影響不明顯，給藥后60min 內，與正常對照組比較，組間差異均無統計學意義。
2. 2 當歸揮發油對多潘立酮誘導的大鼠十二指腸肌電的影響取大鼠36 只，隨機分為6 組，設正常對照組、模型對照組、多巴胺對照組和當歸揮發油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg三個劑量組，每組6 只，按上述方法建立測試系統，觀察記錄各組大鼠十二指腸慢波肌電波形，待穩定后，除正常對照組大鼠灌胃10ml /kg 生理鹽水外，其余各組大鼠灌胃3mg /kg 多潘立酮， 30min 后，記錄5min 內慢波肌電作為給藥前對照值。第40min，除正常對照組和模型對照組尾靜脈注射0. 1% 泊洛沙姆生理鹽水溶液10ml /kg 外，當歸揮發油三個劑量組大鼠分別尾靜脈注射0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 的當歸揮發油乳濁液10ml /kg，多巴胺對照組肌內注射0. 02mg /kg 多巴胺注射液，分別記錄第10、20、40、60min 起始5min 內大鼠十二指腸慢波肌電圖，計算平均SWMF 和SWMA。
結果顯示，與正常對照組比較，模型對照組大鼠SWMF 加快，SWMA 明顯增強; 與模型對照組比較，多巴胺對照組SWMF減慢、SWMA 減弱，0. 04mg /kg 和0. 02mg /kg 當歸揮發油組SWMF 和SWMA 均減弱，0. 01mg /kg 當歸揮發油組SWMF 加快，而SWMA 減弱。
2. 3 當歸揮發油對新斯的明誘導的大鼠十二指腸肌電的影響分組、給藥與測試方法同2. 2. 2，實驗大鼠肌內注射0. 1mg /kg甲硫酸新斯的明建立腸功能亢進模型，對照組肌內注射1. 0mg /kg 硫酸阿托品，當歸揮發油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg三個劑量組分別于給當歸揮發油后記錄第10、20、40、60min 起始5min 內大鼠十二指腸慢波肌電圖，計算平均SWMF 和SWMA。結果顯示，與正常對照組比較，模型對照組大鼠SWMF 加快，SWMA 明顯增強; 與模型對照組比較，硫酸阿托品對照組SWMF 減慢、SWMA 減弱，0. 04mg /kg 和0. 02mg /kg 當歸揮發油組SWMF 和SWMA 均減弱，0. 01mg /kg 當歸揮發油組SWMF 減慢。
2. 4 當歸揮發油對氯化鋇誘導大鼠十二指腸肌電的影響分組、給藥與測試方法同2. 2. 2，實驗大鼠腹腔注射0. 02mg /kgBaCl2建立腸功能亢進模型，對照組腹腔注射2. 4mg /kg 鹽酸維拉帕米，當歸揮發油0. 04mg /kg、0. 02mg /kg、0. 01mg /kg 劑量組分別于給當歸揮發油后記錄第10、20、40、60min 起始5min 內大鼠十二指腸慢波肌電圖，計算平均SWMF 和SWMA。
3 討論
十二指腸肌電活動的指標包括快波和慢波的振幅及頻率，但在本實驗的過程中，使用BL-420F 生物機能實驗系統提供的區間測定方法，觀察到快波在麻醉動物身上出現的時間集中在動物有蘇醒跡象左右時，而其他時間段不易檢測到，快波的出現受麻藥的影響比較大，因此，在麻醉動物在體檢測十二指腸肌電快波變化的可行性交差，本研究重點監測慢波頻率和振幅的變化，探討胃腸功能狀態。現代研究認為，胃腸運動是一種非常復雜、精細且高度協調的活動，是消化系統最重要的生理功能之一，它要受神經和體液多種因素的共同調節，通過內分泌、旁分泌和神經分泌而行使功能。目前已發現的常見的引起平滑肌收縮的興奮性神經遞質和激素，如乙酰膽堿( Ach) 、P 物質( SP) 、胃動素( MTL) 、胃泌素( GAS) 等; 抑制性神經遞質和激素，如一氧化氮( NO) 、血管活性腸肽( VIP) 、生長抑素( SS) 、神經降壓肽( NT)等。而激素的作用依賴于相應的受體，研究發現的已參與調節胃腸道的受體主要包括5-HT 受體、組胺受體、膽堿能M 受體、多巴胺受體、腎上腺能受體( α 和βR) 以及多種胃腸激素受體。在調節過程中，不論是興奮性神經遞質的增多或減少還是抑制性神經遞質的增多或減少，均會使兩者原有的相對平衡遭到破壞，變成失衡狀態，從而導致胃電節律的異常，影響胃腸平滑肌舒縮活動甚至出現紊亂而出現一系列的臨床癥狀。
關于當歸揮發油對胃腸平滑肌的影響，前期在體實驗和離體實驗研究均顯示，對不同種屬動物不同狀態下的胃腸平滑肌都存在一定的調節作用，甚至當歸不同炮制品的揮發油以及不同提取方法所得的揮發油也均可不同程度的影響胃腸功能及活動。本研究結果顯示，當歸揮發油對麻醉大鼠十二指腸慢波肌電頻率和振幅均有影響，當歸揮發油對多潘立酮、新斯的明和氯化鋇誘導的大鼠十二指腸平滑肌慢波肌電頻率的變化均呈現明顯的拮抗作用，由此可以初步推斷當歸揮發油對胃腸平滑肌作用的靶部位有多巴胺受體、M 受體和鈣離子通道。
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