分子生物學技術(shù)論文參考

時間：2021-03-29 18:05:16 論文我要投稿

分子生物學技術(shù)論文參考

　　隨著醫(yī)學的不斷發(fā)展，生物學也不斷在創(chuàng)新，其中，現(xiàn)代分子生物學技術(shù)起到關(guān)鍵作用。下面小編整理了分子生物學技術(shù)論文，歡迎閱讀!

分子生物學技術(shù)論文參考

　　農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的分子生物學技術(shù)

　　【摘要】本文主要介紹了酶聯(lián)免疫分析技術(shù)、聚合酶鏈式反應技術(shù)、試紙條快速檢測技術(shù)、流動注射免疫分析技術(shù)等分子生物學檢測技術(shù)的原理、開發(fā)及其在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測中的應用。

　　【關(guān)鍵詞】農(nóng)產(chǎn)品;有毒有害物質(zhì);分子生物學;檢測技術(shù)

　　0 前言

　　民以食為天，食以安為先。農(nóng)產(chǎn)品安全性要求農(nóng)產(chǎn)品中不應含有可能損害或威脅人體的物質(zhì)或因素，它關(guān)系到人體健康和社會穩(wěn)定。隨著世界經(jīng)濟全球化、貿(mào)易自由化和農(nóng)產(chǎn)品國際貿(mào)易的迅速發(fā)展，農(nóng)產(chǎn)品安全已成為事關(guān)人民健康和構(gòu)建和諧社會的重大戰(zhàn)略問題，及時、安全、準確地檢測出農(nóng)產(chǎn)品中的病原微生物是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的重要內(nèi)容。隨著農(nóng)產(chǎn)品分析物質(zhì)的不斷微量和痕量化，農(nóng)產(chǎn)品基質(zhì)的不斷復雜，僅使用傳統(tǒng)分析技術(shù)已難以解決所有的問題。分子生物學技術(shù)不僅可以簡化前處理過程、而且操作簡便、檢測成本低、安全可靠，且能進行特異性處理分析，其在農(nóng)產(chǎn)品分析中占據(jù)越來越高的比例[1]，目前在農(nóng)產(chǎn)品檢測中常用的`技術(shù)包括：酶聯(lián)免疫分析技術(shù)(ELISA)、基因芯片技術(shù)、分子印跡技術(shù)、聚合酶鏈式反應(PCR)技術(shù)、試紙條快速檢測技術(shù)、流動注射免疫分析技術(shù)、生物傳感器技術(shù)(biosensor)等。分子生物學技術(shù)解決了傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品前處理所不能解決的問題，特別是在農(nóng)產(chǎn)品中有毒有害物質(zhì)檢測中發(fā)揮了重要的作用。

　　1 應用于農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的分子生物學技術(shù)

　　1.1 酶聯(lián)免疫分析技術(shù)

　　酶聯(lián)免疫分析技術(shù)是20世紀70年代初期由荷蘭學者Weeman與Schurrs和瑞典學者Engvall與Perlman幾乎同時提出的。最初ELISA主要用于病毒和細菌的檢測，20世紀70年代后期開始廣泛應用于抗原、抗體的測定，范圍涉及到一些藥物、激素、毒素等半抗原分子的定性定量檢測。它是在RIA理論的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性標記免疫分析技術(shù)。它利用酶標記物同抗原抗體復合物的免疫反應與酶的催化放大作用相結(jié)合，既保持了酶催化反應的敏感性，又保持了抗原抗體反應的特異性，極大的提高了靈敏度，且克服了RIA操作過程中放射性同位素對人體的傷害。酶聯(lián)免疫分析法在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中最為常用[2]。農(nóng)獸藥殘留免疫分析方法的建立包括待測物選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備、測定方法建立、樣本前處理方法和方法評價等步驟。ELISA具有樣品前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時間短，適合于做成試劑盒現(xiàn)場篩選等優(yōu)點，使其可試驗快速現(xiàn)場監(jiān)測，是現(xiàn)階段農(nóng)產(chǎn)品安全檢測領域應用較多的一項檢測技術(shù)。目前酶聯(lián)免疫檢測的農(nóng)、獸藥殘留種類主要包括：有機磷農(nóng)藥、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥、有機氯類農(nóng)藥、氨基甲酸酯類、獸藥類等。

　　1.2 PCR技術(shù)(聚合酶鏈式反應技術(shù))

　　該技術(shù)誕生于1985年，由美國Cetus公司和加州大學聯(lián)合創(chuàng)建。PCR技術(shù)利用變性與復性原理，在體外使用DNA 聚合酶，在引物的引導和脫氧核糖核苷酸(dNTP)的參與下將模板在數(shù)小時內(nèi)進行百萬倍擴增。該技術(shù)可選擇性地放大特定的DNA序列，因此在農(nóng)產(chǎn)品致病性微生物檢測方面發(fā)揮著越來越重要的作用[3]。實時定量PCR技術(shù)是近年發(fā)展起來的新型技術(shù)，該技術(shù)通過直接測定PCR 過程中熒光信號的變化，利用電腦分析軟件對PCR過程中產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物進行動態(tài)監(jiān)測和自動定量，從而成功地實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍。而且，使用實時定量PCR技術(shù)不需要進行凝膠電泳，避免了交叉污染，使反應具有更強的特異性和更高的自動化程度。隨著分子生物學技術(shù)的不斷發(fā)展，多重PCR[4]、標記 PCR和不對稱PCR等多種不同的PCR方法都被應用于農(nóng)產(chǎn)品檢測中，它們的應用使PCR技術(shù)擁有了更高的靈敏度和更短的周期[5]。

　　1.3 試紙條快速檢測技術(shù)

　　試紙條與試劑盒相比較具有更加易于攜帶、檢測更加迅速等優(yōu)勢。在實際檢測過程中，特別是現(xiàn)場快速檢測，并不一定需要對每個樣品都獲得定量數(shù)據(jù) 而只需要定性地判別出某個樣品是否含有某種農(nóng)獸藥，含量是否超過規(guī)定標準既可[6]。因此只需要幾分鐘或十幾分鐘就可以獲得結(jié)果的快速檢測試紙條是最為合適的檢測工具[7]。試紙條技術(shù)與試劑盒相類似，其特點是以微孔膜作為固相載體。標記物可用酶或各種有色微粒子，如彩色乳膠、膠體金、膠體硒等，以紅色的膠體金最為常用。固相膜的特點在于其類似濾紙的多孔性。液體可穿過固相膜流出，也可以通過毛細管層析作用在膜上向前移行。常用的固相載體膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜等。試紙條技術(shù)主要包括酶標記免疫檢測技術(shù)(immunoenzyme labeling technique)和膠體金標記免疫檢測技術(shù)(immunogold labelling technique)。酶標記免疫檢測技術(shù)是以酶為示蹤標記物，而膠體金標記免疫檢測技術(shù)是以膠體金作為示蹤標記物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術(shù)。

　　1.4 流動注射免疫分析技術(shù)

　　流動注射免疫分析法是將速度快、自動化程度高、重現(xiàn)性好的流動注射分析與特異性強、靈敏度高的免疫分析集為一體。這種分析方法具有分析時間短、需要樣品量小和操作簡便等特點[8]。利用FIIA對一些樣品分析，測定耗時不足 1min。FIIA有：均相FIIA和非均相FIIA。流動注射免疫分析主要包括：流動注射脂質(zhì)體免疫分析技術(shù)、流動注射熒光檢測、流動注射化學發(fā)光檢測、流動注射分光光度檢測和流動注射電化學檢測。利用FIIA 是一種靈敏性、專一性、準確性好、快速、節(jié)約成本的方法，樣品也不需要預處理和富集。

　　2 結(jié)語

　　隨著經(jīng)濟的全球化發(fā)展和農(nóng)產(chǎn)品的跨區(qū)域、跨國際流通，對農(nóng)產(chǎn)品病原菌的檢測要求也越來越高。從定性和定量兩方面出發(fā)，準確、快速、經(jīng)濟的檢測方法是農(nóng)產(chǎn)品安全檢測的發(fā)展方向。盡管分子生物學檢測方法具有諸多優(yōu)點，但目前它們大多處于實驗室階段，不能廣泛應用于實踐，僅能作為標準檢測方法的參考。因此，在今后的工作中應進一步加快研究步伐，建立真正實用的農(nóng)產(chǎn)品快速檢測方法。產(chǎn)品快速檢測方法。

　　【參考文獻】

　　[1]楊大進.改革開放30年食品理化檢測方法的發(fā)展[J].中國食品衛(wèi)生雜志，2009，21(4)：309-312.

　　[2]尤敏霞.酶聯(lián)免疫吸附法在食品檢驗中的應用[J].河南預防醫(yī)學雜志，2009，20(3)：237-238，240.

　　[3]周曉紅，李暉，楊杏芬.食品中諾如病毒RT-PCR檢測技術(shù)研究進展[J].國外醫(yī)學衛(wèi)生學分冊，2009，36(4)：234-238.

　　[4]宋岱松.多重PCR技術(shù)在食品安全檢測中的應用[J].山東畜牧獸醫(yī)，2009，30(5)：57-58.

　　[5]雷永良，王曉光，葉碧峰，梅建華，柳付明，陳莎彬，蘭進權(quán)，李永芬，陳秀英.實時熒光定量技術(shù)在食品污染物監(jiān)測中的應用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2009，19(4)：828-830，857.

　　[6]黃小燕，梁珠嫻，李繁，魯玉花.鹽酸克倫特羅快速檢測試紙條的應用探討[J].云南大學學報：自然科學版，2008，30(S1)：446-449.

　　[7]高志賢，周煥英.食品安全現(xiàn)場快速檢測技術(shù)研究進展[J].上海食品藥品監(jiān)管情報研究，2008(2)：42-46.

　　[8]金紹祥.流動注射分析法與多種儀器分析聯(lián)用的進展[J].理化檢驗：化學分冊，2009，45(2)：238-241.

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