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人參中的水溶性蛋白含量測試論文

時間:2021-06-13 09:33:13 論文 我要投稿

人參中的水溶性蛋白含量測試論文范本

  1 儀器與材料

人參中的水溶性蛋白含量測試論文范本

  DS-1型高速組織搗碎機(上海標本模型廠);高速離心機Minispin(德國Eppendorf公司);CP225D型電子天平(十萬分之一,北京賽多利斯儀器系統有限公司);透析帶(XH420,截留分子量:6000-8000);LL3000 型冷凍干燥機(德國Heto公司);Multiskan MK3型酶標儀(Thermo公司);DYY-8C型電泳儀(北京六一儀器廠);JD801凝膠電泳圖像分析系統(江蘇省捷達科技發展有限公司);

  Tris(Sigma公司);硫酸銨(Sigma公司);SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳低分子量標準蛋白(分子量依次為:97.0 kDa,66.2 kDa,43.0 kDa,31.0 kDa,20.1 kDa,14.4 kDa),購自于中科院上海生物化學研究所。其它試劑均為國產分析純。

  5年生園參、野山參及西洋參均購自于吉林省靖宇縣,經長春中醫藥大學研發中心姜大成教授鑒定,人參為五加科(Araliaceae)植物Panax ginseng C. A. Meyer的干燥根莖,野生者為野山參。西洋參為五加科植物西洋參Panax quinquefolium L.的干燥根莖,符合《中國藥典》(2005版Ⅰ部)的規定。

  2 方法與結果

  2.1 園參、野山參、西洋參水溶性蛋白的制備

  取5年生園參、野山參、西洋參鮮品適量,稱重,高速組織搗碎機粉碎,加適量含0.15 mol/L NaCl的pH 7.4 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液,4℃浸提24h,10 000 r/min離心10min,上清液用80%硫酸銨沉淀,4℃靜置過夜,沉淀加適量體積的pH7.4 10mmol/L Tris-HCl緩沖液溶解,對蒸餾水過夜透析,-20℃預凍,凍干,得三者的水溶性蛋白,收率見表1。由表1可知,野山參及西洋參中水溶性蛋白的含量較園參中的蛋白低很多,西洋參中的水溶性蛋白為園參的50%左右,而野山參中的水溶性蛋白,僅為園參的10%。

  2.2 SDS-PAGE檢測及凝膠圖譜分析

  取上述制備的蛋白樣品各5 mg,用蒸餾水配制成濃度為5 mg/ml的蛋白溶液,經SDS-PAGE檢測(分離膠濃度為15%,濃縮膠濃度為5%。濃縮膠電壓為70 mV,分離膠電壓140 mV。電泳結束后用考馬斯亮藍R250染色,最后用含45%甲醇和10%冰醋酸的水溶液脫色至背景清晰),結果見圖1。

  采用JD801凝膠電泳圖像分析系統對電泳結果進行分析,生成各泳道密度曲線圖[橫軸為泳帶的遷移率(Rf),縱軸為泳帶的積分光密度值(IOD)],結果見圖2~5,每條泳帶對應的分子量、遷移率、積分光密度值及其百分比(每條泳帶的`積分光密度值占整個泳道所有條帶積分光密度值的百分比)見表2~5。

  由電泳結果可知,園參、野山參和西洋參的水溶性蛋白存在很大的差異,尤其是園參與野山參的差異最大。通過JD801凝膠電泳圖像分析系統的分析結果可以看出,三者的蛋白的分子量主要分布在60 000~10 000Da范圍內,但在含量上卻存在很大的不同。園參蛋白包括分子量為60 229.34Da,38 819.94Da,27 634.28Da,25 151.99Da,21 276.71Da,18 187.72Da,16 467.65Da,10 448.78Da等8種蛋白,含量均比較高,其中分子量為27 634.28Da和25 151.99Da的蛋白的含量最高,其次為分子量60 229.34Da,16 467.65Da的兩種蛋白;野山參蛋白包括分子量為60 229.34Da,48 607.40Da,38 617.48Da,28 218.35Da,26 641.09Da,22 536.37Da,14 832.50Da,9 313.36Da等8種蛋白,但含量比較高的蛋白只有兩種,分子量分別為60 229.34Da,14 832.50Da,其它幾種蛋白的含量較園參均比較低;西洋參蛋白包括分子量為60 229.34Da,41 118.23Da,39 023.45Da,27 634.28Da,21 840.31Da,18 572.13Da,15 466.11Da,10 781.79Da等8種蛋白,其中分子量為27 634.28Da, 60 229.34Da,18 572.13Da 3種蛋白的含量較高,其它幾種蛋白的含量較園參也均比較低。

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