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HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量論文

時間:2021-06-13 14:00:53 論文 我要投稿

關于HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量論文

  清開靈膠囊由金銀花、板藍根、梔子、水牛角、膽酸等組成,具有清熱解毒功效,主治上呼吸道感染、病毒性感染、高熱等癥。梔子苷為梔子的主要有效成分之一,清開靈膠囊的質量標準目前未收載梔子苷含量測定方法,為了更好控制藥品質量,我們采用高效液相色譜(HPLC)法測定該制劑中的梔子苷含量,實驗結果表明,該方法分離度高、重復性好,獲得了滿意的結果。

關于HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷的含量論文

  1、儀器與試藥

  Agilent 1100型HPLC儀,Rev.B.02.01 SR1色譜工作站,Gracesmart C18色譜柱(250 mm×4.0 mm,5 μm);超聲波處理儀MUS/1006。梔子苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號110749-200613);清開靈膠囊樣品(廣州白云山明興制藥有限公司,批號Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇為色譜純。

  2、方法與結果

  2.1 色譜條件

  色譜柱為Gracesmart C18(250 mm×4.0 mm,5 μm),流動相為乙腈-水(15∶85),檢測波長為238 nm,流速為1.0 mL/min,進樣量10 μL[1]。

  2.2 供試溶液的制備

  2.2.1 對照品溶液的制備

  精密稱取梔子苷對照品15.1 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,精密量取5 mL,置100 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每1 mL含15.1 μg的`溶液,即得。

  2.2.2 供試品溶液的制備

  取本品10粒,除去膠囊殼,內容物精密稱定,研細,取粉末0.25 g,精密稱定,置25 mL量瓶中,加甲醇20 mL,超聲處理(功率300 W,頻率33 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。

  2.2.3 陰性樣品溶液的制備

  按處方組成,取除梔子外的其余藥味,按工藝要求制成不含梔子苷的清開靈膠囊,再按供試品溶液的制備方法操作,得陰性樣品溶液。

  2.3 空白試驗

  按上述儀器和實驗條件,取Mk2901批供試品溶液、陰性樣品溶液、梔子苷對照品溶液分別注入液相色譜儀,測定。結果供試品色譜圖中,呈現與對照品保留時間相同的色譜峰,且基線平穩,分離度好,陰性樣品在此保留時間無色譜峰。

  2.4 線性關系

  分別精密吸取濃度為0.302 mg/mL對照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,分別吸取10 μL注入液相色譜儀,測得峰面積。以峰面積為縱坐標,梔子苷對照品進樣量(μg)為橫坐標,繪制標準曲線,計算回歸方程:Y=1 351.973X-4.454,r=0.999 8,在0.060 4~0.302 0 μg范圍內,對照品進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

  2.5 精密度試驗

  取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件重復進樣6次,測定峰面積,計算其RSD=0.83%。結果表明儀器精密度良好。

  2.6 穩定性試驗

  取Mk2901批供試品溶液,按上述色譜條件分別于0、2、4、6、8、12 h測定峰面積,計算其RSD=0.86%。結果表明樣品在10 h內穩定。

  2.7 重復性試驗

  取本品內容物(批號Mk2901)10 g,混合均勻,精密稱取樣品5份,每份0.25 g。按供試品溶液制備方法制備,依上述測定條件測定,并計算含量,結果平均含量為1.602 4 mg/g,RSD=1.22%。表明本法重復性好。

  2.8 加樣回收率試驗

  精密量取重復性試驗項下的樣品0.1 g各5份,分別精密加入濃度為302 μg/mL的梔子苷對照品溶液0.5 mL,按供試品溶液制備方法處理得供試品溶液,按上述色譜條件測定,計算回收率,結果表明此色譜條件測定梔子苷含量回收率良好。見表1。表1 加樣回收率試驗結果(略)

  2.9 樣品測定

  分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 μL,分別注入液相色譜儀,依上法測定,即得。依上述色譜條件測定Mk2901、Mk2902、Mk2903批清開靈膠囊中梔子苷含量,結果見表2。表2 梔子苷含量測定結果(略)

  3、討論

  梔子苷為環烯醚萜苷類,易溶解于甲醇等溶劑,溶解時采用超聲處理,有利于促進樣品中的梔子苷溶解。梔子苷在238 nm波長處有最大吸收,故選定238 nm作為檢測波長。流動相比較了乙腈-水(15∶85)和乙腈-水(10∶90)系統,梔子苷主峰均可與雜質峰分離,為縮短檢測時間,故選擇乙腈-水(15∶85)為流動相。

  本試驗建立的清開靈膠囊中梔子苷含量HPLC測定方法,靈敏度、穩定性及重復性能夠符合含量測定的要求,而且操作簡便,可以作為清開靈膠囊生產中梔子苷含量的測定方法。

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