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補骨脂平喘作用分析的論文

時間:2021-06-10 11:30:11 論文 我要投稿

關于補骨脂平喘作用分析的論文

  1材料與儀器

關于補骨脂平喘作用分析的論文

  1.1動物

  SD大鼠,70只,SPF級,雌雄各半,180g左右,合格證號:0012625,由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供。

  1.2試劑

  卵白蛋白批號:970612上海化學試劑公司;氫氧化鋁干粉批號:20020301-2廣州化學試劑廠;滅活百日咳桿菌(100億個/ml)廣東省中醫院提供;大鼠IL-4(批號20060620)、IFN-γ(批號20060620)ELISA試劑盒由晶美生物工程有限公司提供;IL-5(批號20983008)ELISA試劑盒由BanderMedsystems提供。

  1.3補骨脂不同溶劑提取物補骨脂95%乙醇提取物浸膏,濃度:3.45g藥材/ml(簡稱浸膏);補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物,濃度:10.0g藥材/ml(簡稱石油醚萃取物);補骨脂95%乙醇提取醋酸乙酯萃取物,濃度:6.67g藥材/ml(簡稱醋酸乙酯萃取物);補骨脂95%乙醇提取水萃取物,濃度:10.0g藥材/ml(水萃取物);補骨脂水提取物,濃度:10.0g藥材/ml(簡稱水提取物);補骨脂95%乙醇提甲醇洗脫物,濃度:2g藥材/ml(簡稱甲醇洗脫物),以上試劑均由廣州中醫藥大學中藥學院提供。

  1.4儀器酶標儀BIO-RADSModel550,日本;CSW-Ⅰ型超聲霧化器汕頭光電研究所;10L玻璃干燥器。

  2方法

  2.1分組

  將動物隨機分成7組,10只/組:哮喘模型組(給水,1.0ml/100g)、浸膏組(藥材0.9g/100g)、石油醚萃取物組(藥材2.5g/100g)、醋酸乙酯萃取物組(藥材1.7g/100g)、水萃取物組(藥材2.5g/100g)、水提取物組(藥材10.0g/100g)、甲醇洗脫物組(藥材2.5g/100g)。以上各組動物連續灌胃給藥治療10次,1次/d。末次治療后2h,各組動物心臟采血5ml,1000r/min離心15min,血清分裝(1ml/管)保存于-70℃低溫冰箱內待測:IL-4,IFN-γ,IL-5(嚴格按照ELISA試劑盒說明書分別檢測)。

  2.2卵蛋白哮喘大鼠模型的建立

  2.2.1大鼠致敏

  上述分組中每只動物腹腔注射抗原液0.5ml/100g(含卵蛋白100mg、氫氧化鋁干粉100mg和2.5×109個百日咳桿菌/ml,制成懸濁液)[7]致敏第1次,次日每只大鼠再次腹腔注射0.5ml/只致敏液加強。

  2.2.2激發和治療

  首次致敏后第15天,于每天上午8~9時大鼠置于10L玻璃干燥器內超聲霧化吸入2%卵蛋白20min激發哮喘,連續14d。激發后第4天起,于每天激發后大鼠口服給相應試劑治療(見“2.1實驗分組”)。正常組以生理鹽水取代抗原液按0.5ml/100g腹腔注射致敏大鼠,第2天以0.5ml/只腹腔注射生理鹽水加強;首次致敏后第15天,每天上午8~9時該組大鼠超聲霧化吸入生理鹽水20min激發哮喘,連續14d。激發后第4天起,于每天激發后大鼠口服給蒸餾水治療。

  2.3統計分析結果

  采用四川大學黃志勇主編的(PEMS3.0)《中國醫學百科全書·醫學統計學》統計軟件包進行統計:兩組均數比較t檢驗(方差齊)或t′(方差不齊)。

  3結果

  3.1補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠IL-5含量的影響結果見表1。由表1可見,大鼠服用補骨脂不同溶劑提取物后,血清IL-5含量呈下降趨勢,其中補骨脂浸膏、水萃取物、水提取和甲醇洗脫物各成分組大鼠血清IL-5含量降低明顯,與哮喘模型組比較P<0.05或P<0.01,差異有顯著意義。而石油醚和醋酸乙酯萃取物兩成分組大鼠血清il-5含量降低不明顯,與哮喘模型組比較p>0.05,無顯著性差異。

  3.2補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠IL-4含量的影響結果見表1。由表1可見,大鼠服用補骨脂不同溶劑提取物后,血清IL-4含量呈升高趨勢,其中補骨脂浸膏、石油醚萃取物和水提取物各成分組大鼠血清IL-4含量升高明顯,與哮喘模型組比較P<0.05或P<0.01,差異有顯著意義。而醋酸乙酯萃取物、水萃取物和甲醇洗脫物三成分組大鼠血清il-4含量升高不明顯,與哮喘模型組比較p>0.05,無顯著性差異。

  3.3補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠IFN-γ含量的影響結果見表1。由表1可見,大鼠服用補骨脂不同溶劑提取物后,不同溶劑成分大鼠血清IFN-γ含量升降不一致,其中補骨脂浸膏和石油醚萃取物兩成分組大鼠血清IFN-γ含量升高明顯,與哮喘模型組比較P<0.05,差異有顯著意義。醋酸乙酯萃取物、水萃取物和甲醇洗脫物三成分組大鼠血清IFN-γ含量減低顯著,與哮喘模型組比較P<0.05或P<0.01,有顯著性差異,而補骨脂水提對ifn-γ含量未見明顯影響,與哮喘模型組比較p>0.05,無顯著性差異。表1不同提取物對哮喘大鼠IL-5,IL-4,IFN-γ含量的影響(略)

  3.4補骨脂不同溶劑提取物對哮喘大鼠Th1/Th2(IFN-γ/IL-5)的影響哮喘模型組、醇提浸膏組、石油醚萃取組、甲醇洗脫物組和水提取物組的Th1/Th2比值依次為(n=10):0.5±0.2,1.1±0.5,0.9±0.5,0.8±0.4和1.2±0.5。提示,大鼠服用補骨脂醇提上述4種溶劑萃取物后,血清Th1/Th2比值呈增加明顯,與哮喘模型組比較P<0.05,差異有顯著意義。而醋酸乙酯萃取物(0.4±0.2,n=10)和水萃取物(0.6±0.2,n=10)兩成分組大鼠血清Th1/Th2降低或增加不明顯,與哮喘模型組比較P>0.05,無顯著性差異。

  4討論

  哮喘與Th1細胞分泌的IFN-γ等細胞因子及Th2細胞產生的IL-4,IL-5等細胞因子含量和Th1/Th2比值密切相關。Th2的主要代表產物IL-4,能促進B細胞產生IgE,引發炎癥介質釋放的鏈式反應,促進炎癥細胞的趨化聚集,引起呼吸道血管通透性增加和粘膜水腫,平滑肌痙攣及粘液分泌亢進,是引起哮喘的重要因素。Th1的主要代表產物是IFN-γ,能抑制IL-4,IL-5等細胞因子的產生,進而抑制IgE的產生和Eos活性,抑制IAR和LAR,是哮喘免疫調節中的一個重要的抑制因子,許多細胞因子通過它發揮生物效應[8]。因此,采用IFN-γ,IL-5,IL-4作為哮喘敏感指標進行藥物篩選具有合理性。補骨脂是臨床上常用的補腎助陽中藥,具平喘之功,臨床上常用于虛寒喘咳[9]。補骨脂是今后應加強研究和開發的抗氣道抗炎癥中藥之一[2]。我院從20世紀80年代初使用補骨脂注射液治療支氣管哮喘取得了理想的療效,但其作用的物質基礎并不清楚。因此,我們在前期研究的基礎上[2,3],采用卵蛋白哮喘大鼠為模型,以體內血清IFN-γ/IL-4/IL-5含量變化為指標,初步篩選補骨脂平喘作用的有效部位。

  從IFN-γ含量變化來看,補骨脂95%乙醇提取物浸膏和補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物作用明顯,可能是補骨脂平喘的主要成分,但從抑制IL-5和IL-4含量分析,補骨脂95%乙醇提取水萃取物和補骨脂95%乙醇提甲醇洗脫物對Th2細胞產生的IL-4,IL-5細胞因子有較強的抑制作用,其他成分卻升高或對IL-5,IL-4沒有顯著影響,而補骨脂水提取物對IFN-γ含量提高作用不明顯。另外,補骨脂95%醇提水萃取物顯著降低IL-5和IFN-γ含量,同時在給藥的過程中我們發現水萃取物的毒性明顯強于其他成分,這與其腎毒性是否相關值得關注。根據以上分析,我們初步推測補骨脂平喘有效部位應該主要是醇提成分:補骨脂95%乙醇提取物浸膏,補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物和甲醇洗脫物。

  從哮喘中考察Th1/Th2的比值變化更具有意義[10],因此我們以IFN-γ/IL-5為例,分析Th1/Th2的變化,探討補骨脂3個醇提成分(浸膏、石油醚萃取物和甲醇洗脫物)哪個為平喘的最佳有效部位。哮喘模型組、醇提浸膏組、石油醚萃取物組和甲醇洗脫物組的Th1/Th2依次為(n=10):0.5±0.2,1.1±0.5,0.9±0.5和0.8±0.4,與哮喘組比較三者的P<0.05,差異有顯著意義,但醇提浸膏的比值更大。因此結合前面的分析,我們認為三者的`平喘作用大小依次為:補骨脂95%乙醇提取物浸膏>補骨脂95%乙醇提甲醇洗脫物=補骨脂95%乙醇提取石油醚萃取物。

  【參考文獻】

  [1]黃劍,趙陸華.補骨脂化學成分及藥理研究進展[J].藥學進展,2000,24(4):212.

  [2]鐘南山.未來十年哮喘防治展望[J].實用醫學雜志,2001,17(6):471.

  [3]譚慧淇.補骨脂注射液對支氣管哮喘平喘作用的動物實驗和臨床觀察[J].廣東醫學,1984,11:29.

  [4]鄧時貴,李愛群,歐潤妹,等.補骨脂總香豆素的平喘作用[J].中國現代應用藥學雜志,2001,18(6):439.

  [5]鄧時貴,區勇全,李愛群,等.補骨脂中黑色粘稠物鼻腔給藥的止喘作用[J].西北藥學雜志,2000,15(5):211.

  [6]鄧時貴,李偉英,韓凌.總香豆素抗支氣管哮喘氣道變應性炎癥的作用機制[J].中國新藥雜志,2006,15(9):24.

  [7]童舜華,吳敦序,陳淑俊,等.小青龍湯對哮喘大鼠氣道阻力、肺動態順應性和血嗜酸細胞數的影響[J].中國中醫藥科技,1999,6(2):79.

  [8]BarnesPJ.Effeckofnedocromilsodiumorplatet-activatingfactorinducedairwayresponses[J].JAllergyClinImmunol,1993,92:187.

  [9]柴瑞霽.溫腎助陽化痰飲,攝納腎氣平喘咳-補骨脂治療虛寒喘咳的體會[J].山西中醫,1997,13(4):49.

  [10]鄧時貴,韓凌,李偉英.總香豆素對卵蛋白致敏哮喘大鼠血清Th1/Th2的影響[J].中國現代實用醫學雜志,2005,4(8):1.

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